目的:研究糖皮质激素(地塞米松)和Rho 激酶抑制剂Y-27632对体外培养的人小梁细胞形态及细胞骨架的影响。
方法:采用第6代人小梁细胞,培养至细胞融合为稳定的内皮细胞样形态,加入地塞米松(200mM)继续培养2周,然后用10μM Y-27632分别处理细胞3小时和24小时,Alexa 488-标记鬼笔环肽荧光标记小梁细胞肌动蛋白。光学显微镜观察细胞形态,免疫荧光显微镜观察肌动蛋白和粘着斑蛋白的变化。
结果:与正常培养的人小梁细胞比较,地塞米松处理的小梁细胞边界模糊、肌动蛋白(actin)增加,形成肌动蛋白交联网,同时粘着斑蛋白表达增多。用Y-27632处理后,小梁细胞回缩变圆,肌动蛋白降解或减少,粘着斑蛋白明显减少或趋于消失。中止Y-27632作用后,肌动蛋白及粘着斑蛋白数量有所恢复,表明Y-27632导致的肌动蛋白及粘着斑蛋白改变有一定可逆性。
结论:在糖皮质激素作用下,人小梁细胞肌动蛋白细胞骨架形成肌动蛋白交联网结构,粘着斑蛋白表达增多。推测糖皮质激素诱导小梁细胞骨架改变是激素性青光眼眼压升高的主要原因。Rho激酶抑制剂Y-27632可有效降解小梁细胞骨架,逆转地塞米松所引起的小梁细胞变化,从而可能降低糖皮质激素性高眼压。
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