| 研究目的：
观察人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）对体外培养的兔角膜内皮细胞（rabbit corneal endothelial cell,RCEC）生长的影响，为探索最佳的体外促角膜内皮细胞（corneal endothelial cell，CEC）增殖因素及永生化CEC的制备奠定实验及理论基础。
研究方法：
1. 用揭膜+消化法进行RCEC的体外原代培养。
2. 用神经特异性烯醇化酶（NSE）鉴定培养的RCEC。
3. 阳离子聚合物 SofastTM介导pCI-neo-hTERT质粒转染体外培养RCEC。
4 G418筛选阳性克隆。
5. 对筛选出的hTERT+-RCEC进行传代培养，观察细胞生长变化情况。
6. 超微量ATP酶测试盒测定hTERT+-RCEC的 Na+-K+-ATPase活性，血细胞计数板进行细胞计数。
7. 统计学处理：用SPSS13.0软件，统计数据用 ±S表示，采用重复测量法和方差分析中最小显著法(LSD)进行统计学分析。
结果：
1. 成功实现RCEC的体外原代及传代培养。
2. 培养细胞经NSE染色、苏木素复染后，呈NSE阳性表达。
3. hTERT转染后早期细胞多呈梭形或多角形，与原代细胞相似，但折光性明显增强，保持单层生长。
4. 从生长曲线看hTERT+RCEC比原代细胞的增殖速度快，相同生长时间比后者细胞数量多，更容易达到细胞融合，并仍保持接触抑制。
5. hTERT+RCEC比原代细胞贴壁时间短，接种率更高。
结 论：
1. hTERT+RCEC形态与原代培养RCEC形态相似，转染后早期RCEC多呈梭形或多角形，逐渐伸展呈非典型的六角形形态，保持单层生长，并出现接触抑制，其增殖速度和贴壁能力明显高于原代培养RCEC。
2. 外源基因hTERT可有效促进RCEC分裂增殖，为进一步研究CEC增殖能力奠定了基础。
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