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RNA干扰抑制端粒酶逆转录酶对晶状体上皮细胞增殖的影响研究
作者:蒋永祥  文章来源:复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科  点击数268  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的 探讨RNA干扰抑制端粒酶逆转录酶(TERT)对晶状体上皮细胞(HLEC)增殖影响的特异性和有效性。
方法 实验研究。采用RT-PCR检测体外培养HLEC和视网膜色素上皮细胞(RPEC)二者内源性TERT的表达差异;设计并合成特异性针对人TERT的小RNA干扰片段(siRNA),脂质体转染HLEC,用Real time PCR检测TERT基因表达的变化。不同时间用脂质体转染的TERT siRNA感染体外培养的HLEC和RPEC,分别采用电镜、CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测其对HLEC和RPEC细胞增殖的影响。
结果 RPEC中未见TERT的表达,HLEC中有低水平TERT表达。使用脂质体转染人TERT siRNA 的HLEC较好的抑制TERT表达水平,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。TERT siRNA转染HLEC和RPEC48h后,CCK-8检测细胞增殖抑制情况显示:转染HLEC和RPEC的活性与阴性对照相比,差异无统计学意义(P﹥0.05)。TERT siRNA两次转染HLEC和RPEC 96h,CCK-8检测细胞增殖抑制情况显示:转染的HLEC活性与阴性对照相比,差异有统计学意义(P<0.05),转染的RPEC活性与阴性对照相比,差异无统计学意义(P﹥0.05)。流式细胞仪检测:HLEC组的细胞凋亡率为56.23%,而RPEC组为1.42%。
结论 TERT 特异性siRNA能有效降低TERT的表达并明显抑制HLEC的增殖能力,对RPEC无明显抑制作用。
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