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基因重编程人Tenon's囊成纤维细胞为诱导多潜能干细胞
作者:邓飞  文章来源:中山大学中山眼科中心  点击数340  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 本研究旨在体外诱导人Tenon's囊成纤维细胞(HTFhuman tenon' s fibroblast cells)重编程为诱导多潜能干细胞(iPSinduced pluripotent stem cells),为视网膜神经再生的细胞替代治疗提供新的种子细胞来源。
方法 为了诱导产生iPS细胞,通过包装Retrovirus病毒生成Oct4Sox2c-myc Klf4四种转录因子,将其浓缩后转入HTF细胞,诱导产生iPS克隆。以人胚胎干细胞(hES, human embryonic stem cell)作为阳性对照,通过碱性磷酸酶活性检测,免疫荧光,流式细胞术PCR,以及畸胎瘤形成,从形态和功能上鉴定其多能性。
结果 1. 重编程获得的iPS细胞形态与人ES细胞相似,呈扁平的单层,边界清晰,克隆内的细胞呈蜂窝状,胞核与胞质比增大。
2. 通过紫外分光光度计检测,证实iPS细胞具有与人ES细胞相当的碱性磷酸酶活性。
3. 通过免疫荧光检测和流式细胞术,证实iPS细胞表达ES细胞特异性表面抗原TRA-1-60SSEA-1 NanogOct-4等。
4. 通过PCR检测,证实iPS细胞表达ES标记基因。
5. 通过裸鼠皮下注射iPS细胞诱导畸胎瘤生成,证实iPS细胞具有多向分化潜能。
结论 该实验HTF细胞重编程来源的iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、以及畸形瘤生成能力等方面都与人ES细胞相似,且高表达视网膜祖细胞相关基因SOX2,是视网膜神经再生的有价值的供体细胞。

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