| 目的：探讨体外获得胚胎干细胞源性视网膜干细胞的可能性及可行性方案，以求为青光眼等视神经视网膜变性疾病的治疗开辟新途径。
方法：绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞（GFP-ESCs）经胚胎体阶段培养，以视黄酸及纯化的乳鼠视网膜Müller细胞诱导，在选择性培养基中筛选培养扩增7天，对诱导后细胞进行视网膜干细胞特性的多方面鉴定－包括宏观和超微结构形态特征；核型分析；分裂增殖和自我更新能力检测；向视网膜细胞分化潜能检测，将诱导细胞分化后用免疫荧光细胞化学法检测NF200、MAP2、GAP43、Synaptophysin、S100、GFAP等神经元细胞和胶质细胞标志抗原，及Thy1.1、Rhodopsin、PKC等视网膜细胞标志抗原；采用RT-PCR、流式细胞仪、免疫细胞化学法检测视网膜干细胞标志基因nestin、glutaminase、Brn-3、Pax6 mRNA及抗原表达。
结果: GFP-ESCs经初级诱导，选择性培养基筛选富集7天后，形成大量悬浮生长的神经球样结构，可扩增传代。细胞呈现典型的未分化特征，核型正常，整合BrdU，表达视网膜干细胞标志基因mRNA和抗原，分化产生视网膜样神经细胞，并表达突触功能和Glutamate神经递质功能标志抗原。
结论：通过体外定向诱导体系，胚胎干细胞源性视网膜干细胞可在体外大量获得，并有向视网膜细胞分化的潜能，有望为青光眼等神经变性疾病提供新的治疗途径。
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