目的 探讨超顺磁氧化铁纳米粒(SPIONs)介导碱性成纤维生长因子质粒(bFGF-pcDNA)转染体外培养的猫角膜内皮细胞(CECs)的效率和对角膜内皮细胞活性和增殖特性的影响。
方法 应用多聚赖氨酸(PLL)修饰SPIONs作为基因载体,将 (bFGF-pcDNA)和表达基因为增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒相结合,将二者超声混匀,制备(PLL-SPIONs-bFGF-EGFP-pcDNA)复合体,转染体外培养的猫角膜内皮细胞。通过倒置相差显微镜测量转染效率、western blot测量碱性成纤维细胞的表达,应用细胞计数、MTT分析了解对细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测对角膜内皮细胞的毒性。
结果 普鲁士蓝染色结果显示,转染组细胞胞浆内有大量蓝染铁颗粒,细胞标记率为100%,而未转染对照组细胞胞浆内未见着色颗粒。荧光相差显微镜发现转染48h后细胞转染效率为52.5%,对照组无绿色荧光蛋白表达。台盼蓝活细胞计数,细胞活性数为95.8%,和对照组无区别。Western blot检测结果各组均可在约17ku处见到特异性条带。转染组条带较宽且颜色较深,光密度比率为0.862;对照组为0.689。MTT测定细胞增殖活性表明转染组和空白组统计学差异明显(P=0.005)。流式细胞仪检测各组凋亡细胞无统计学差异(P>0.05)。
结论 聚赖氨酸修饰的超顺磁氧化铁纳米粒能够介导bFGF质粒转染猫角膜内皮细胞,转染后bFGF表达增加,角膜内皮细胞的增殖能力明显提高,而细胞无明显毒性。
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