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超顺磁氧化铁纳米粒介导碱性成纤维细胞因子质粒转染猫角膜内皮细胞           ★★★
超顺磁氧化铁纳米粒介导碱性成纤维细胞因子质粒转染猫角膜内皮细胞
作者:李俊 文章来源:上海交通大学附属第六人民医院 点击数:290 更新时间:2011/9/13
目的  探讨超顺磁氧化铁纳米粒(SPIONs)介导碱性成纤维生长因子质粒(bFGF-pcDNA)转染体外培养的猫角膜内皮细胞(CECs)的效率和对角膜内皮细胞活性和增殖特性的影响。
方法  应用多聚赖氨酸(PLL)修饰SPIONs作为基因载体,(bFGF-pcDNA)和表达基因为增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒相结合,将二者超声混匀,制备(PLL-SPIONs-bFGF-EGFP-pcDNA)复合体,转染体外培养的猫角膜内皮细胞。通过倒置相差显微镜测量转染效率、western blot测量碱性成纤维细胞的表达,应用细胞计数、MTT分析了解对细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测对角膜内皮细胞的毒性。
结果  普鲁士蓝染色结果显示,转染组细胞胞浆内有大量蓝染铁颗粒,细胞标记率为100%,而未转染对照组细胞胞浆内未见着色颗粒。荧光相差显微镜发现转染48h后细胞转染效率为52.5%,对照组无绿色荧光蛋白表达。台盼蓝活细胞计数,细胞活性数为95.8%,和对照组无区别。Western blot检测结果各组均可在约17ku处见到特异性条带。转染组条带较宽且颜色较深,光密度比率为0.862;对照组为0.689。MTT测定细胞增殖活性表明转染组和空白组统计学差异明显(P=0.005)。流式细胞仪检测各组凋亡细胞无统计学差异(P>0.05)。
结论  聚赖氨酸修饰的超顺磁氧化铁纳米粒能够介导bFGF质粒转染猫角膜内皮细胞,转染后bFGF表达增加,角膜内皮细胞的增殖能力明显提高,而细胞无明显毒性。

 

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