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| 人眼球筋膜囊成纤维细胞原代培养方法改进 |
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作者：马晓华 文章来源：山东施尔明眼科医院 点击数：362 更新时间：2012/9/13 
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目的 筋膜囊成纤维细胞过度增殖是滤过泡瘢痕化的主要原因。因此对筋膜囊成纤维细胞进行体外培养是抗滤过泡瘢痕化研究的基础。本实验在传统的组织块培养法基础上进行改进，探索一种高效快速获得原代筋膜囊成纤维细胞的方法。
方法 将术中剪下的组织，用PBS漂洗干净。眼科剪将其剪成糊状，加入大约10倍体积的0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA，置于培养箱中消化60分钟。加入含10﹪胎牛血清的DMEM培养液中止消化，吸管反复吹打数次。离心去上清。加入适量含20%胎牛血清的DMEM培养液，吸管反复吹打数次，转移到25cm塑料培养瓶内，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。第一次观察在接种后第3天，以后每天在倒置显微镜下观察细胞生长状况，连续观察2周。第一次换液在细胞大部分贴壁后（约5天），以后每三天换液一次。原代培养的细胞生长达到80%融合时可以进行传代。小心吸出培养液，PBS轻轻漂洗2遍。加入适量0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA消化并在倒置相差显微镜下观察，待细胞开始收缩、变圆时，加入适量含10﹪胎牛血清的DMEM培养液中止消化，吸管反复吹打瓶壁数次，使细胞脱落。转移到一离心管中，离心去清液。用适量培养液重悬细胞，按1：3比例传代。
结果 原代培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞3天可见贴壁细胞，呈长梭形。7天内可见成纤维细胞从贴壁的组织块中长出，长至融合需约2-3周时间。传代后细胞仍能生长良好。
结论 在传统的组织块培养法基础上进行改进的人眼球筋膜囊成纤维细胞原代方法，能快速有效的获得原代筋膜囊成纤维细胞。避免组织块太湿贴壁不牢，在翻转培养瓶后极易飘起；组织块太干易皱缩细胞因缺少养分和水分而难以长出。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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