| 目的 羊膜移植对MMP-9及TIMP-1在碱烧伤小鼠角膜新生血管中的作用的影响以及MMP-9及TIMP-1在角膜新生血管形成中的作用。方法：6 至8 周龄雌性BalB/c小鼠40只, 将小鼠随机分为实验组和对照组，每只鼠均取右眼为实验眼。采用1mol/L氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜，建立炎症性角膜碱烧伤动物模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术，对照组不行羊膜移植。分别在羊膜移植后的2、7、14天，处死两组小鼠，摘除右眼球，经免疫方法处理行免疫组织化学染色。阴性对照以PBS代替兔抗小鼠MMP-9及TIMP-1多克隆抗体，方法照旧。通过免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜碱烧伤后MMP-9及TIMP-1在角膜中的分布及其平均吸光度值。同时手术后2d开始用裂隙灯显微镜观察眼表情况。结果 免疫组化结果：对照组小鼠阳性染色主要见于角膜上皮细胞、基质层及内皮细胞：烧伤后第2 d,可见角膜上皮细胞MMP－9表达增多，第7 dMMP－9 的染色较第2d明显增强，基质层可见大量新生血管，且血管内皮细胞可见表达，第14d达高峰；TIMP-1开始表达不明显，第7d出现表达，14d达高峰。羊膜移植组各时间点MMP-9表达低于对照组，而TIMP-1表达高于对照组。阴性对照采用PBS 代替羊抗小鼠一抗,碱烧伤后7 d 角膜无棕黄色颗粒。裂隙灯观察结果：对照组:角膜上皮层在术后2～3d 愈合,以后发生上皮缺损,反反复复,形成慢性持续性上皮缺损。新生血管多从下方向角膜中央延伸,以后覆盖整个角膜,多位于角膜前1/ 3 的浅基质层；实验组：术后4～7 d ,上皮细胞向羊膜植片中央向心性生长,手术后12d左右角膜上皮化完成;在手术后第4d 可见有新生血管自角膜缘长入羊膜下,角膜中央保持无血管。结论：碱烧伤小鼠角膜导致了MMP-9表达增加，MMP-9在新生血管形成的过程中起一定作用。羊膜可能具有抑制MMP－9 在碱烧伤小鼠角膜中表达的作用，而且羊膜同时促使TIMP－1在后期表达水平升高,从而抑制MMP－9 的活性,抑制和延迟碱烧伤后角膜溶解的发生和发展。 |
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