目的 观察无血清干细胞培养基对视网膜母细胞瘤肿瘤细胞长期培养的影响。
方法 取人视网膜母细胞瘤消化后进行无血清培养，并连续传代。通过免疫组化染色，real-time PCR，分化培养试验等检测细胞的干细胞特性，通过药物敏感性试验、小鼠致瘤试验等观察培养后肿瘤细胞的耐药及致瘤特性。同时利用流式细胞分析技术对CD44和CD133两种表面标志在培养细胞中的表达情况进行了检测分析。
结果 肿瘤细胞在无血清培养基中以肿瘤球的形式生长，并可以连续传代达30代以上，同时在分化培养基中肿瘤球可以分化成有突起的类神经元或类胶质细胞。肿瘤球高表达Oct4，nestin及pax6，免疫组化染色见肿瘤球显示nestin，pax6及ABCG2阳性。相反，分化后的细胞高表达视网膜神经元及胶质细胞标志MAP2，GFAP, OpsinB和Nrl，免疫组化显示NF200，GFAP，recoverin及PKCa阳性。同时CD133及CD44都在肿瘤球中高表达，在诱导分化后表达显著降低。相比分化的细胞，肿瘤球细胞对卡铂更具耐药性。致瘤试验显示仅2000个肿瘤球细胞便可以在NOD/SCID小鼠中形成类似人类的视网膜母细胞瘤。
结论 长期培养的肿瘤球细胞为体外研究视网膜母细胞瘤中肿瘤干细胞提供了较好的工具，将有助于进一步分离鉴定肿瘤干细胞，以及筛选敏感化疗药物和制定新的化疗方案。